目前，檢測轉(zhuǎn)印到WB膜上蛋白的技術(shù)眾多包括熒光標記、銀染和化學發(fā)光法等；可是，每一種技術(shù)都有其局限，人們一直致力于尋找提高WBs定量準確度和動態(tài)檢測范圍的技術(shù)方法。這里，介紹一種新的在SpectraMax i3或Paradigm多功能酶標儀上檢測WBs膜的蛋白分析方法，Scanlater Western Blot卡盒使在酶標儀上進行蛋白質(zhì)免疫印跡成像檢測成為可能。膜上使用銪元素-螯合物或鏈霉素標記二抗特異結(jié)合被研究的蛋白。銪元素標記具有長熒光壽命周期，可至1ms級別，所以熒光的檢測采用時間分辨的模式，從而可以減少來自于自發(fā)熒光和其他短壽命周期的雜光的背景。WBs膜被置于酶標儀內(nèi)，然后使用TRF卡盒進行WBs膜優(yōu)化掃描，此方法不涉及酶的檢測加之銪元素-螯合物標記物具有很強的光漂白抗性，因而信號十分穩(wěn)定能至幾周到幾個月。這就允許對膜進行重復掃描以及可能進行不同條帶的強度對比以及根據(jù)標品進行更精確的定量。TRF檢測方式采用單光子計數(shù)模式，所以理論的動態(tài)檢測范圍為>105；實際應(yīng)用中，動態(tài)檢測范圍則受限于高含量條帶的熒光飽和以及非特異性結(jié)合造成的背景因素。由于不使用CCD，所以此方法不會出現(xiàn)高光溢出現(xiàn)象，而這是化學發(fā)光和普通熒光檢測的常見問題，所以能夠提供非常銳利的條帶和出色的圖像質(zhì)量。這一新穎的多功能酶標儀檢測平臺上的Scanlater Western Blot檢測系統(tǒng)以其操作簡便、檢測靈敏和信號的超高穩(wěn)定性，提供了出色的WBs檢測性能表現(xiàn)，必將多功能酶標儀在實驗室應(yīng)用方面帶來又一重大突破！
應(yīng)用模塊：
標配Scanlater卡盒、一塊膜適配器、軟件分析插件，
該卡盒需放入Molecular Devices公司SpectraMax® i3X 或Paradigm多功能酶標儀進行使用
2、背景消除：銪元素時間分辨熒光標記，具有超長熒光壽命，至1ms級，使用TRF檢測模 式能夠極大地降低自發(fā)熒光和其他來源的背景噪聲
3、節(jié)省時間：無需進行ECL般的耗時優(yōu)化過程
4、降低成本： 不再需要成本高昂的X-射線膠片和顯影劑
5、即插即用：可隨時在SpectraMax® i3 或 SpectraMax Paradigm多功能酶標儀上進行高性能 WB檢測，極大地擴展了其在實驗室研究方面的應(yīng)用
