PCR技術(shù)及分子克隆技術(shù)的快速發(fā)展，促進(jìn)了抗體庫技術(shù)的出現(xiàn)和進(jìn)步。PCR使人們能夠使用引物擴(kuò)增出全套免疫球蛋白可變區(qū)基因，分子克隆技術(shù)能夠利用大腸桿菌成功表達(dá)出具有抗原結(jié)合功能的抗體分子片段，然后通過親和篩選獲得特異性抗體可變區(qū)基因，這種全套抗體基因表達(dá)文庫稱為抗體庫，它使得抗體制備繞過雜交瘤和免疫，能夠建立天然全套展示文庫，并從庫中容易地篩選出任一感興趣的抗體。

抗體庫技術(shù)經(jīng)歷了初期組合抗體庫、噬菌體展示抗體庫及核糖體展示抗體庫三個(gè)階段。初期組合抗體庫是采用RT-PCR方法從淋巴細(xì)胞中克隆出抗體輕鏈和重鏈Fd段全套基因，并分別組建到表達(dá)載體中，感染大腸桿菌，得到輕鏈和重鏈基因庫，再將輕鏈和重鏈基因隨機(jī)重組到同一個(gè)表達(dá)載體中，形成組合抗體庫。

噬菌體展示技術(shù)典型流程

隨后，噬菌體抗體庫迅速取代了組合抗體庫，它是將外源多肽或蛋白質(zhì)表達(dá)并展示于噬菌體表面，再通過淘洗和富集獲得表達(dá)有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體，進(jìn)而獲得目的抗體的技術(shù)。它的主要流程為：

1） 構(gòu)建噬菌體展示庫：從B淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增抗體的基因文庫，插入到噬菌體的基因組中，使抗體片段與噬菌體衣殼蛋白融合表達(dá)并展示于噬菌體表面，形成噬菌體展示抗體庫。

2） 抗體庫淘選：將噬菌體文庫與固定抗原孵育，洗滌未結(jié)合的噬菌體，接著再洗脫與抗原特異性結(jié)合的噬菌體。此過程需要重復(fù)3-4次，以富集到高親和力的噬菌體。在篩選過程中一般需要采用ELISA或是WB的方法進(jìn)行富集驗(yàn)證。

丹納赫生命科學(xué)旗下美谷分子儀器的SpectraMax i3x多功能酶標(biāo)儀，可選配SpectraMax MiniMax 300細(xì)胞成像系統(tǒng)、Scanlater Western Blot檢測卡盒，配合相應(yīng)試劑以及行業(yè)領(lǐng)先的數(shù)據(jù)獲取和分析軟件SoftMax Pro，在一臺儀器上即可完成ELISA和Western Blot 實(shí)驗(yàn)。

SpectraMax i3x多功能酶標(biāo)儀

3） 噬菌體感染與篩選：將高親和力的噬菌體感染大腸桿菌，瓊脂板鋪板培養(yǎng)挑選出克隆。

噬菌體淘選后感染大腸桿菌，進(jìn)行克隆挑選，手工挑選工作量巨大且容易出錯(cuò)。美谷分子的QPix系列高通量微生物克隆篩選系統(tǒng)可進(jìn)行自動(dòng)加樣、涂布、挑取、復(fù)制、點(diǎn)樣、文庫重排的工作，能夠減輕人力負(fù)擔(dān)，且擁有高達(dá)3000個(gè)克隆/小時(shí)的挑取速度，可以滿足高通量挑選的的要求。

美谷分子儀器的 QPix高通量微生物克隆篩選系統(tǒng)

QPix配套的分析軟件可以利用克隆的大小、圓度、軸比以及克隆間距進(jìn)行篩選，從而更加準(zhǔn)確高效地挑取克隆。

高亮顯示選取噬菌斑   

4） 抗體驗(yàn)證：篩選到合適的噬菌體之后，進(jìn)行測序獲得正確的序列進(jìn)行抗體的表達(dá)。此時(shí)，需要進(jìn)行抗體的親和力測定及功能鑒定。

貝克曼庫爾特本土創(chuàng)新的CytoFLEX系列流式細(xì)胞儀，可進(jìn)行親和力、CDC/ADCC/ADCP的效應(yīng)功能分析。如進(jìn)行親和力的檢測，可采用梯度稀釋的IgG孵育同等細(xì)胞數(shù)的能表達(dá)特異性抗原的陽性細(xì)胞和不能表達(dá)特異性抗原的陰性細(xì)胞，再用PE-抗 IgG抗體來檢測與陽性細(xì)胞結(jié)合的IgG抗體，通過檢測平均熒光強(qiáng)度(MFI)計(jì)算抗體與靶細(xì)胞結(jié)合的平衡解離常數(shù)(KD)來判定親和力的強(qiáng)弱。

流式檢測親和力模擬圖

貝克曼庫爾特的CytoFLEX系列流式細(xì)胞儀擁有高達(dá)23個(gè)參數(shù)設(shè)計(jì)，從單激光四色至六激光二十一色保證了優(yōu)越的檢測性能，并且符合FDA 21 CFR Part 11要求。

貝克曼庫爾特的CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀

噬菌體展示技術(shù)擁有諸多優(yōu)勢，它實(shí)現(xiàn)了蛋白/多肽基因型與表型的統(tǒng)一，在蛋白質(zhì)與其遺傳基因之間建立了直接的物理聯(lián)系；可以快速篩選得到所需抗體，通過這項(xiàng)技術(shù)不僅可以篩選到一般抗原的特異性抗體，也可以產(chǎn)生非免疫原性或毒性抗原的抗體，且所得到的抗體可以是Fab、scFv等，應(yīng)用廣泛。利用噬菌體展示技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體，生產(chǎn)快速，操作簡便，效率更高，且可以進(jìn)行人源化抗體的生產(chǎn)，具有較高的利用價(jià)值。

丹納赫生命科學(xué)擁有多種高通量的篩選技術(shù)和多元化的鑒定表征手段，可以幫助加速度抗體的開發(fā)。